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          我們在進行二手熒光定量PCR儀實驗時會遇到的3個參數
          更新時間:2022-10-23   點擊次數:646次
             二手熒光定量PCR儀是一種可以實時檢測核酸擴增的技術,在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號的變化對PCR過程進行實時監控,以此實現對初始模板的定量分析。無需參比染料,無需定期校準,采用歸一化算法,快速準確直觀的呈現實驗結果,用戶使用方便簡潔。我們在做熒光定量PCR時提到的三個名稱:擴增曲線,標準曲線,熔解曲線。
           
           ?。?)擴增曲線:擴增曲線有兩種展現形式,一種是線性,一種是對數形式。我們通常是用CT來推算樣品中樣品的濃度。CT值越高說明模板濃度越低。上面也詳細說明了原理,在這里就不過多贅述。
           
           ?。?)標準曲線:將已知濃度的樣品(標準品)經過梯度稀釋后分別取樣進行熒光定量PCR,得到的一系列的Ct值,用這個Ct值與Log模板數對應可以得到一個相關的曲線,我們叫標準曲線??梢杂眠@個標準曲線中的一些參數來判斷這個熒光定量PCR體系的優劣。
           
           ?。?)熔解曲線:Tm值,MeltingTemperature(解鏈溫度),PCR雙鏈產物的退火溫度。這兩個圖是在熒光定量PCR結束后,對產物進行逐步升溫時進行的監測,可以看到在達到其解鏈溫度時,熒光信號會有一個忽然的下降。我們將測得的這個曲線叫做熔解曲線。理論上如果PCR得到特異性產物則只有一個Tm值,在溶解曲線上表示只有單峰存在。如果是多相峰,那么可以判斷產物不是單一的,發生了非特異擴增。
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